As micoses emergiram nas últimas décadas dentre as principais causas de enfermidades humanas. Devido à ausência de especificidade para um determinado hospedeiro, os fungos são capazes de causar doenças em múltiplas espécies. Estes microrganismos interagem com hospedeiros ambientais, como a espécie de ameba de vida livre Acanthamoeba castellanii e macrófagos de diversas espécies, encontrando no interior destes, um ambiente propício para proteção, sobrevivência e disseminação. Nosso grupo descreveu a importância do receptor de manose (MR), identificado na superfície amebóide, como uma das principais vias de ligação fúngica. Na literatura, o receptor de manose também é descrito por sua participação na interação entre fungos e macrófagos. Assim, é possível estabelecer uma relação de similaridade entre amebas e macrófagos, não apenas por compartilharem propriedades de estrutura celular, motilidade, fisiologia, captura por emissão de pseudópodos e fagocitose, mas também pelo semelhante mecanismo de interação com microrganismos, apontando para possível evolução convergente dos receptores envolvidos. Diante disso, investigamos as proteínas de superfície de ambos modelos, afim de encontrar possíveis candidatos à receptores de alta afinidade contra manoproteínas e mananas de parede celular fúngica. Inicialmente, após biotinilação das superfícies de ambos, seus extratos apresentaram perfil proteico variando entre 10-250 KDa. Determinamos a ligação dessas proteínas aos fungos patogênicos Candida albicans, Cryptococcus neoformans e Histoplasma capsulatum. Confirmamos que os extratos de macrófagos murinos apresentaram maior intensidade de ligação quando comparados aos extratos de A. castellanii, apontando para a maior complexidade proteica daqueles em relação à superfície amebóide durante a interação. Observamos altíssima afinidade dos extratos à manose e mananas. Assim, direcionamos a nossa procura, através da purificação dos extratos protéicos dos fagócitos por cromatografia de afinidade, em coluna de manose e enriquecimento em placa sensibilizada com manose solúvel. E assim, confirmamos por Western blot, a presença desta lectina no extrato. Identificamos nos extratos enriquecidos de A. castellanii proteínas de, aproximadamente, 150 kDa, 75 kDa, 55 kDa e 35 KDa. Já nos enriquecidos de macrófagos murinos foram identificadas proteínas entre 170 e 50 KDa, além de bandas de menores pesos moleculares, em torno de 35KDa. Para determinar a importância desta lectina ligadora de manose na interação, realizamos ensaios de fagocitose, na presença e ausência de manose solúvel como inibidor. Porém encontramos menores porcentagens de inibição nos experimentos com macrófagos, concluindo que, diferentemente das amebas, diversos outros receptores podem participar do mecanismo de interação, de forma compensatória, destacando a importância deste tipo de interação para cada espécie de hospedeiro e a possível diversidade. Em complemento, realizamos ensaios para avaliar a capacidade de eliminação dos fagócitos, em ambas condições. E os resultados mostraram menor número de unidades formadoras de colônias, na presença de manose, em ambos os casos, o que nos leva a concluir que há dependência deste receptor para a interação das células fagocíticas com a superfície fúngica, levando a sua sobrevivência no interior dos fagócitos. Os dados sugerem que, provavelmente, ocorre a evolução e o surgimento de outras vias de interação em hospedeiros superiores. Futuramente, pretendemos realizar a construção, produção e caracterização de lectinas-Fc, utilizando sequências das lectinas ligadoras de manose identificadas, por espectometria de massas, na fusão com a porção Fc efetora de imunoglobulinas murinas. Como manoproteínas e mananas estão presentes universalmente na parede celular fúngica, estas proteínas quiméricas permitiriam o reconhecimento dos fungos por receptores Fc (FcR) presentes na superfície dos fagócitos, promovendo mecanismos de imunidade (inata e celular) e de ação antifúngica.

Palavras-chave: A. castellanii; macrófagos; interação; fungos patogênicos; receptores de manose